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转录组测序

服务简介

转录组测序(Transcriptome Sequencing)转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和。转录组研究是基因功能及结构研究的基础和出发点,通过高通量测序,能够全面快速地获得某一物种特定组织或器官在某一状态下的几乎所有转录本序列信息,已广泛应用于基础研究、临床诊断和药物研发等领域。根据建库方式不同,转录组测序一般分为常规转录组测序、均一化文库转录组测序以及链特异性转录组测序三类。

均一化文库能够降低高丰度表达基因,有效富集低丰度表达基因,从而降低冗余率。均一化处理技术具有广泛的应用,包括新转录本的发现和注释、FFPE样品RNA的分析等。

链特异性转录组测序是由于常规转录组测序无法区分来源于正负链的转录本,可能会导致部分遗传信息的遗失。通过链特异性的建库方法,可以确定转录本的来源,从而更精确的计算转录本的信息,分析结果更加可信。

技术流程

转录组测序技术流程
Cold Spring Harb Protoc. 2015 Apr 13;2015(11):951-69. doi: 10.1101/pdb.top084970

服务优势

  • 云蜂生物提供从样品提取、建库测序到数据分析解读的一站式解决方案;
  • 除了交付高质量的测序数据和各种常规性分析结果,我们从待解决的科学问题出发,对数据做深入的分析和挖掘,寻求科学问题的答案;
  • 我们的分析报告包含发表质量的图表和详尽的结果描述,协助您快速完成文章撰写;
  • 从项目方案设计开始,我们的项目负责人(三年以上基因组学研究经验)就全程负责项目执行,直到文章最终投稿发表;

服务流程与内容

  • 项目设计方案优化:在项目前期,根据您的研究目的以经费预算,我们提供项目设计的优化和改进方案;
  • 样品准备:我们可以接收多种不用类型的样本(包括血样,组织、唾液、血液以及FFPE样品),避免您花费大量精力准备合格的RNA样本;
  • 样品提取与文库构建:使用QIAGEN公司的RNA提取试剂盒提取高质量的RNA,并对检测合格的RNA进行文库构建;
  • 高通量测序:用Illumina公司最新的HiSeq 4000或者X10平台完成高通量测序, Paired-end测序,reads读长150bp;
  • 数据分析与解读:利用经过验证的标准化流程完成基本数据分析,并由专业的项目负责人(三年以上基因组研究经验)和您制定个性化分析计划,完成个性化分析任务;
  • 提交分析结果和报告:完成数据分析后,提交原始测序数据、完整的数据分析结果和专业易懂的数据分析报告。

分析内容

  • 基因与转录本定量
  • 差异表达分析
  • 差异表达基因及样品的聚类分析
  • 差异表达基因功能富集分析
  • 预测新的转录本、优化基因结构、鉴定基因可变剪接
  • SNP、InDel分析
  • 差异基因的蛋白网络互作分析
  • RNA编辑分析
  • 主成分分析(五个或五个以上样品)
  • 融合基因鉴定

参考文献

[1]. Comprehensive analysis of RNA-Seq data reveals extensive RNA editing in a human transcriptome. Nature Biotechnology.2012, 30:253–260.

[2]. Deep RNA sequencing at single base-pair resolution reveals high complexity of the rice transcriptome. Genome Research. 2010, 20:646-654

[3]. RNA-Seq analysis of prostate cancer in the Chinese population identifies recurrent gene fusions, cancer-associated long noncoding RNAs and aberrant alternative splicing.Cell Research. 2012, 1-16.

[4]. Transcriptome analysis by strand-specific sequencing of complementary DNA. Nucleic Acids Research. 2009, Vol.37, No.18.